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全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)方法及其應(yīng)用分析

更新時(shí)間:2022-11-22點(diǎn)擊次數(shù):982
  全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)方法:
 
  (1)臺(tái)盼藍(lán)染色法
 
  臺(tái)盼藍(lán)染色是分別計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞和活細(xì)胞的方法之一。染色的原理是臺(tái)盼藍(lán)無(wú)法穿透活細(xì)胞的完整細(xì)胞膜,因此活細(xì)胞不被染色;然而,死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜被破壞,染料通過(guò)細(xì)胞膜在細(xì)胞中富集,使細(xì)胞變藍(lán)。然而,臺(tái)盼藍(lán)染色可能無(wú)法準(zhǔn)確區(qū)分有核細(xì)胞和細(xì)胞碎片,因此它傾向于低估細(xì)胞總數(shù)并高估細(xì)胞生存能力。
 
  (2)熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)法
 
  吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理:活細(xì)胞通過(guò)AO染色發(fā)出綠色熒光,而死細(xì)胞通過(guò)PI染色發(fā)出紅色熒光。重要的是,對(duì)于具有復(fù)雜背景的細(xì)胞,例如外周血單核細(xì)胞,具有更多細(xì)胞片段或簇的細(xì)胞數(shù)量可以避免檢測(cè)到細(xì)胞片段。這種方法最近也被應(yīng)用于單細(xì)胞基因組學(xué),其中綠色對(duì)應(yīng)于完整的細(xì)胞,紅色對(duì)應(yīng)于成功分離的細(xì)胞核。該策略允許研究人員計(jì)算未裂解的剩余細(xì)胞在細(xì)胞總數(shù)中的百分比,并計(jì)數(shù)細(xì)胞核以指示樣品質(zhì)量,幫助研究人員確定是否繼續(xù)單細(xì)胞基因組學(xué)過(guò)程。
 
  全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在單細(xì)胞測(cè)序中的應(yīng)用如下:
 
  單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)目前正在全面應(yīng)用,如單細(xì)胞RNA測(cè)序(scRNA-seq)和染色質(zhì)轉(zhuǎn)座酶可及性測(cè)序(ATAC-seq)。與對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序的傳統(tǒng)方法相比,單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)突出了細(xì)胞之間的差異,這有助于更深入地了解樣本材料。例如,scRNA-seq可以比較健康和患病狀態(tài)的轉(zhuǎn)錄譜,而ATAC-seq可以解釋染色質(zhì)的可及性及其對(duì)基因表達(dá)的影響。
 
  然而,這些研究都需要對(duì)分離的細(xì)胞核進(jìn)行精確計(jì)數(shù),因?yàn)槲膸?kù)制備需要少量未裂解的細(xì)胞,并且樣品中沒(méi)有細(xì)胞團(tuán)塊和碎片。此外,許多單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)需要完整的細(xì)胞核才能正常工作。
 
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